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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測定試劑盒的組成

更新時間:2023-12-06      瀏覽次數(shù):498

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測定試劑盒的組成

比色法 50 /24 樣)

一、測定原理:

β-N-

β-N-Acetylglucosaminidase,NAG)廣泛存在于各種組

織器官、體液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板中,是溶酶體

中的一種酸性水解酶。底物在 NAG 作用下水解,釋放

出游離的對硝基酚。加入堿性溶液停止反應(yīng),并使對硝

基酚顯色。在 400nm 處測吸光度,可計算酶活力單位。

二、試劑組成及配制: (試劑 2-8℃保存,有效期 6 個月)

試劑一:溶液 40mL×1 瓶。

試劑二:底物,粉劑×1 支。

試劑三:終止劑 60mL×2 瓶。

試劑四:液體 6mL×1 瓶。(天冷會有結(jié)晶析出,測試前

置于 37℃水浴直至透亮)

試劑五:3mmol/L 對硝基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液 2mL×1 瓶。

0.6mmol/L 對硝基酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制: 3mmol/L

硝基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液用蒸餾水作 5 倍稀釋,即

3mmol/L 對硝基酚∶蒸餾水=14 稀釋。

底物緩沖液的配制:底物溶解度小,配制底物溶液時,

應(yīng)先用適量試劑一將試劑二粉劑 1 支調(diào)成糊

狀,再邊攪拌邊逐漸加試劑一到 30mL,混勻

至溶解(不可加熱)。配好后的底物緩沖

液為過飽和溶液,如有結(jié)晶,可靜置或離心后

取上清進(jìn)行檢測。用不完的底物緩沖液 4℃

保存兩個月以上。

三、操作步驟:

五、注意點:

1、用分光光度計測定時吸光度至 0.60 或酶活力至 60 單位

呈線性,超出此范圍應(yīng)將標(biāo)本用生理鹽水稀釋后重測,

結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

2、尿酶濃度隨尿流率而變動,因此尿酶測定要求留取 24

小時尿;但因留 24 小時尿不方便,也不準(zhǔn)確,故用

單位/肌酐"比值計算酶排出率,效果較好。

附錄Ⅰ: 大鼠腎皮質(zhì)中 NAG 的測定

1、 樣本前處理:

準(zhǔn)確稱取樣本的重量,按照重量(g):體積(mL)=1 : 9

的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機械勻

漿,制成 10%勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清

再用生理鹽水稀釋成 1%的勻漿液待測。(該勻漿濃度僅

為參考用,客戶測定時可以根據(jù)這一濃度自行摸索樣本的

實際所需濃度)

2 操作步驟:

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測定試劑盒的組成



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