油紅O染色液實(shí)驗(yàn)流程及注意事項(xiàng)！

脂質(zhì)(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑(如乙醇、乙MI等)。人體的脂肪主要有兩種：1、儲(chǔ)存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、腎、胰腺等部位；2、結(jié)構(gòu)脂肪，如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等)，主要分布于細(xì)胞內(nèi)。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類，呈中性。中性脂肪染色經(jīng)常采用蘇丹II、蘇丹III、蘇丹IV、蘇丹黑B、油紅O法等，傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料，最近發(fā)現(xiàn)偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色，油紅O是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，較易與甘油三脂結(jié)合呈小脂滴狀，與磷脂結(jié)合力稍差，其染色原理一般認(rèn)為是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。

油紅O染色液(培養(yǎng)細(xì)胞專用)主要用于顯示人工培養(yǎng)細(xì)胞的脂肪變性和類脂質(zhì)的異常沉著，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多數(shù)中性脂肪滴，鑒別培養(yǎng)細(xì)胞中所發(fā)生的變化及其性質(zhì)，標(biāo)本不采用含有乙醇的固定液，脂肪的陽(yáng)性染色結(jié)果呈橘黃至紅色，但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定。

產(chǎn)品名稱：油紅O染色液（細(xì)胞專用）

產(chǎn)品規(guī)格：4×20ml

儲(chǔ)存條件：4℃

有效期：12個(gè)月

用途：專門用于脂肪/脂滴染色

產(chǎn)品組成

自備材料：

60%異丙醇、蒸餾水

實(shí)驗(yàn)步驟（僅供參考）：

一、培養(yǎng)細(xì)胞

1、 移除細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS洗兩次，加ORO Fixative固定液固定20-30min。

2、 棄去固定液，用蒸餾水洗2次。

3、 加入60%異丙醇浸洗5min。

4、 棄去60%異丙醇后加入新配制好的ORO Stain，浸染10-20min。

5、 棄去染色液，水洗2-5次，直到無(wú)多余染液。

6、 加入Mayer蘇木素染色液，復(fù)染核1-2min。棄去染液后水洗2-5次。

7、 入ORO Buffer 1min，棄去。

8、 加入蒸餾水覆蓋細(xì)胞并在顯微鏡下觀察。

二、細(xì)胞涂片

1、 制備新鮮骨髓、血液涂片，入ORO Fixative固定10～15min。

2、 取出涂片，放于流通的空氣中10～15min。

3、 入新配制好的ORO Stain，浸染15min。

4、 入60%異丙醇漂洗20～30s，流水沖洗，入蒸餾水稍微清洗。

5、 入Mayer蘇木素染色液，復(fù)染核2min。

6、 入ORO Buffer 1min。

染色結(jié)果：

注意事項(xiàng):

1、 ORO染色液不夠穩(wěn)定，易產(chǎn)生沉淀，不宜提前配制。

2、 Mayer 蘇木素染色液復(fù)染時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)。

3、 染色結(jié)果不能長(zhǎng)期保存，應(yīng)盡快觀察及照相。

4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！